应用Cre/loxP系统在转化细胞水平上高效删除转基因水稻的标记基因

摘要：

研究了Cre/loxP系统在转化细胞水平上删除转基因水稻中抗性标记基因的可行性和效率.采用农杆菌介导法将Cre/loxP标记基因剪切系统载体pNCG导入水稻细胞,用G418筛选法获得水稻抗性愈伤组织后,在组织培养不同阶段的培养基中添加25 μmol/L雌激素进行Cre基因的诱导表达和标记基因的剪切,PCR检测T0植株中标记基因nptⅡ、重组酶基因Cre和目标基因gusA的整合情况.将扩增结果为gusA(+)/nptⅡ(-)/Cre(-)的转基因植株统计为标记基因剪切成功的植株.结果表明,在抗性愈伤组织培养的预分化前、预分化和分化阶段添加雌激素诱导表达重组酶Cre均能成功切除标记基因序列,标记基因剪切成功率为6.82％～46.43％.在预分化前采用液体培养基添加雌激素诱导处理愈伤组织3d,T0植株中标记基因的剪切效率高达173.33％,主要原因是雌激素处理提高了愈伤组织绿苗分化率.直接在分化培养基中添加雌激素诱导处理,T0植株中标记基因剪切成功率达46.43％,剪切效率(144.44％)也较高.表明雌激素诱导的Cre/loxP系统能在水稻抗性愈伤组织水平上实现对标记基因序列高效快速删除.

关键词：水稻、雌激素诱导、Cre/loxP重组酶系统、转化细胞、标记基因删除

所属期刊栏目：25

分类号：Q943.1;S511.035.3(植物学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30871511,30771317;农业部转基因生物新品种培育重大专项2008ZX0801-003,2009ZX08001-022B;国家863计划资助项目2006AA10Z1A9;中国博士后基金资助项目20090450477

在线出版日期：2012-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：580-586