缺刻缘绿藻溶血磷脂酰乙醇胺酰基转移酶(LPEAT)的基因克隆与特征分析
缺刻缘绿藻三酰甘油(TAG)中花生四烯酸(ArA)占其总脂肪酸含量的68.0%.为了弄清ArA是如何被优先地用于合成 TAG, 鉴于 Lands 循环是通过改变膜脂的脂肪酸组成进而影响 TAG 的脂肪酸组成, 本研究选择在 Lands循环中起关键作用的溶血磷脂酰乙醇胺酰基转移酶(LPEAT)作为突破口.运用反转录PCR与3'-及5'-cDNA末端快速扩增技术,自缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl)中克隆到MiLPEAT;它的cDNA序列全长1303 bp,其中,5'-非翻译区(UTR)长129 bp, 3'-UTR长193 bp, 开放阅读框长981 bp, 编码326个氨基酸残基; 以缺刻缘绿藻基因组DNA为模板扩增得到该基因长为1871 bp的DNA序列;这两序列的比对结果显示,MiLPEAT含有6个内含子,将其开放阅读框(ORF)分割成7个外显子.通过多序列比对及生物信息学分析, 发现MiLPEAT存在一个磷酸酰基转移酶结构域PlsC, 并含有LPEAT家族所具有的NH(x)4D、FPEGT等4个特征性模体; Wolfpsort等在线预测结果以及 MiLPEAT 羧基端存在的双赖氨酸模体"KKxx", 暗示它可能位于内质网并参与分泌途径.基于不同植物 LPEAT的氨基酸序列所构建的邻接聚类图表明, MiLPEAT因与2型LPEAT有不同的序列特征而形成不同的分支, 但却与1型 LPEAT聚类在一起, 推测它们的功能可能更近似.通过荧光定量 PCR检测, 发现 MiLPEAT的基因转录量在氮饥饿8 h 时显著(P<0.05)增加; 与其变化相应的溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)相对丰度却极显著地(P<0.01)减少49%,但磷脂酰乙醇胺(PE)相对丰度的增加却不显著; 推测在氮饥饿过程中增加的磷脂酰乙醇胺(PE)可能被磷脂:二酰甘油酰基转移酶作用以合成为TAG, 致使缺刻缘绿藻TAG含量的增加.
缺刻缘绿藻、溶血磷脂酰乙醇胺酰基转移酶(LPEAT)、三酰甘油(TAG)、磷脂、氮饥饿
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S917(水产基础科学)
国家自然科学基金项目31772821,31402274;国家海洋局可再生能源专项基金项目SHME2011SW02;上海高校水产科学高峰学科建设项目
2018-06-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共12页
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