南瓜MSAP体系的优化及引物筛选
以南瓜自交系北观(Cucurbita maxima)为材料,利用正交设计L16 (45)优化南瓜MSAP预扩增和选择性扩增体系的主要因素.结果 表明,第一步最佳酶切时间2h,Hap Ⅱ(Hpa Ⅱ,Msp Ⅰ)用量0.5μL;第二步酶切时间6h,EcoR Ⅰ用量0.4 μL;连接体系包括酶切产物21 μL,EcoR Ⅰ接头(5μmol·L-1)、HapII接头(5μmol·L-1)各1.0 μL,连接时间12h,T4 DNA Ligase用量为0.5μL;最佳预扩增反应体系(25μL)包含2.0 μL连接产物,1.5 μL 10×PCR Buffer (Mg2+ plus),2.0 μL dNTP(2.5 mmol·L-1),0.6 μL Taq酶(5U·μL-1),0.4 μL上下游引物(10 μmol·L-1);最佳选择性扩增反应体系为预扩增产物稀释120倍的模板4.0 μL,其他同预扩增体系.最后,利用建立好的MSAP体系进行6％聚丙烯酰胺凝胶电泳验证并筛选出适于南瓜MSAP分析的36对引物,表明优化后的MSAP体系多态性好,体系稳定,可重复,为后续进行南瓜MSAP分析奠定了基础.
南瓜、MSAP、体系优化、引物筛选
河南省高等学校重点科研项目18A210012
2019-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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