土拉弗朗西斯菌FopA单抗阻断ELISA抗体检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种基于FopA单抗的阻断ELISA抗体检测方法.方法 以pET-32a为载体表达土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白,并以其免疫BALB/c小鼠制备单抗,以LVS超声裂解液为包被抗原、HRP标记FopA单抗为阻断抗体,建立直接阻断ELISA方法,利用阴性血清平均值+2SD或3SD确定该方法临界值,测定该方法特异性、敏感性、重复性及其与平板凝集试验的符合率,并利用该方法检测攻毒小鼠血清抗体变化趋势.结果 筛选获得1 株稳定分泌IgG1(κ型)单抗的杂交瘤细胞,并基于该单抗建立阻断ELISA方法,包被抗原最优浓度为3 μg/mL、HRP标记FopA单抗最优稀释度为1:4 000、待检血清最优稀释度为1∶10,阴性临界值为27％、阳性临界值为41％、可疑区间为27％～41％,该方法的特异性、敏感性、重复性和符合率均良好,可检出攻毒9d后小鼠血清抗体.结论 成功制备FopA单抗,并基于该单抗建立一种快速、准确和高通量抗体检测的阻断ELISA方法,为我国土拉弗朗西斯菌流调和防控提供技术支撑.

关键词：土拉弗朗西斯菌、FopA、阻断ELISA、单抗、原核表达

所属期刊栏目：39

分类号：R378.6+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：850-856