结核分枝杆菌Rv1048c基因异源表达菌株的构建及其对小鼠巨噬细胞存活率的影响研究

摘要：

目的 对结核分枝杆菌H37Rv菌株中功能未知基因Rv1048c进行生物信息学分析,构建重组表达菌株MS_Rv1048c,并研究其对小鼠巨噬细胞存活率的影响.方法 软件在线分析Rv1048c的氨基酸序列及其编码蛋白的基本性质,利用PCR扩增Rv1048c目的片段,构建重组质粒pMV261-Rv1048c,转入耻垢分枝杆菌,构建重组菌株MS_Rv1048c与空载菌MS_vec.分析该基因对菌株生长的影响;通过CCK-8、总胆固醇测定和油红(O)染色的方法,初步探究重组菌株感染巨噬细胞后对其活性的影响.结果 Rv1048c基因全长1116 bp,蛋白由371个氨基酸构成,分子式是C1778 H2821N521O525S10,预测该蛋白是一种定位在细胞外的含有多个磷酸化位点的、不稳定的亲水性蛋白.本试验首次成功构建未知基因Rv1048c的异源表达载体,生长曲线测定发现该基因使菌株生长缓慢,细胞实验发现基因增强了重组菌株对细胞的侵袭能力.结论 Rv1048c可能具有结核分枝杆菌独有的生长特性,并降低在菌株侵染下的细胞的存活率.分析Rv1048c未知基因和构建异源表达菌株,有助于后续对结核分枝杆菌Rv1048c基因功能的探究,为进一步解析结核分枝杆菌的致病机制奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌、生物信息学分析、pMV261、Rv1048c基因、巨噬细胞RAW 264.7

所属期刊栏目：39

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：吉林省科技厅科技发展计划重点研发项目No.20210204038YY

在线出版日期：2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：228-234