猪链球菌组氨酸三联体蛋白多抗的制备及Dot-ELISA检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种猪链球菌的快速、简便检测方法.方法 根据猪链球菌2型强毒株05ZYH33组氨酸三联体蛋白HtpsC蛋白基因序列设计特异性引物,将HtpsC蛋白基因克隆至原核表达载体pET-30a并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经0.2 mmol/LIPTG、15℃条件下诱导表达HtpsC蛋白.经Ni-IDA纯化后免疫新西兰白兔获得抗血清,通过亲和层析纯化制备Anti-HtpsC多克隆抗体.在此基础上,建立检测猪链球菌的斑点酶联免疫吸附检验法(Dot-ELISA),进一步优化了检测条件,并对该方法的特异性和敏感性进行评价.结果 通过原核表达成功制备了 HtpsC蛋白.Western blot结果显示,制备的Anti-HtpsC多克隆抗体可特异性结合HtpsC蛋白.优化的最佳多抗使用浓度为2.5 μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为1 ∶ 3 000.特异性试验结果表明,含HtpsC蛋白基因的多种血清型猪链球菌均可呈现清晰的黄褐色斑点,但不含该蛋白基因的9型猪链球菌除外.而其他对照菌株:大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、化脓性链球菌、无乳链球菌和粪肠球菌均无斑点出现.灵敏度试验结果表明,该方法的检测限为1×106 CFU/mL.结论 本研究建立的Dot-ELISA方法特异性强,灵敏度良好,可用于检测多种血清型猪链球菌.

关键词：猪链球菌、HtpsC蛋白、Dot-ELISA

所属期刊栏目：38

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划No.2018YFC1602800

在线出版日期：2022-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：657-665