轮状病毒NSP5克隆、鉴定、表达及其条件优化

摘要：

目的 为制备NSP5多克隆抗体及进一步研究NSP5的功能和在轮状病毒复制中的作用奠定基础.方法 利用分子克隆的技术构建出原核表达蛋白质粒NSP5-pGEX-6P-1和真核表达质粒NSP5-pFLAG--CMV-3,其中NSP5-pFLAG-CMV-3转染细胞后通过Western Blot和间接免疫荧光法观测NSP5在293T细胞里的表达和定位;NSP5-pGEX-6P-1经转化E.coli BL21(DE3)后从IPTG浓度、温度及历经时间3个方面摸索出最优化的诱导蛋白表达条件,并经GST琼脂糖树脂纯化蛋白且用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定.结果 构建了真核表达载体NSP5-pFLAG-CMV-3和原核表达载体NSP5-pGEX-6P-1.经NSP5-pFLAG-CMV-3转染后的293T细胞通过Western Blot验证NSP5蛋白在细胞中成功表达,间接免疫荧光观察到重组蛋白在细胞质中富集.37℃、8h、0.4 mmol/L IPTG诱导是NSP5-pGEX-6P-1蛋白表达的最适条件,且以包涵体形式汇聚在沉淀中进行表达.SDS-PAGE和Western Blot表明重组蛋白纯化成功.结论 成功构建NSP5重组表达系统,成功优化了NSP5蛋白诱导表达的条件并纯化蛋白.

关键词：轮状病毒;NSP5;基因重组;蛋白表达;蛋白纯化

所属期刊栏目：37

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：辽宁省教育厅青年育苗项目No.JYTQN201925

在线出版日期：2021-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：703-708