结核分枝杆菌KatG-ACT271CCT(Thr271Pro)突变与异烟肼耐药关系的研究

摘要：

目的 探讨结核分枝杆菌katG ACT271CCT(Thr271Pro)基因点突变对异烟肼耐药性的影响.方法 应用基因克隆技术合成野生型katG、突变型katG(AGC315ACC)和katG(ACT271CCT)基因片段,分别重组至质粒pET22b(+),转入表达菌BL21(DE3) pLySs,IPTG诱导目的蛋白表达,亲和层析法对目的蛋白分离纯化.最终检测重组katG蛋白过氧化物酶及过氧化氢酶活性.此外,通过软件AutoDock4.0采用半柔性对接方式分别模拟野生型katG蛋白、Thr271Pro突变型katG蛋白与异烟肼相互作用.结果 成功获得纯化katG重组蛋白.相比野生型katG蛋白(过氧化氢酶活性361.5 U/mg和过氧化物酶活性77.6 U/mg),Th r271 Pro突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降56％和63％(158.8 U/mg和28.7 U/mg),而Ser315Thr突变型katG蛋白过氧化氢酶和过氧化物酶活性分别下降74％和75％(96.2 U/mg和19.7 U/mg).分子对接结果提示,异烟肼与Thr271Pro突变型katG蛋白结合自由能较野生型升高,Thr271 Pro突变蛋白与异烟肼结合的亲和性降低.271位氨基酸突变后,Thr271Pro突变型katG蛋白氧化反应活性空腔发生一定的变形.结论 katGThr271 Pro基因突变引起katG蛋白酶活性部分缺失和氧化反应活性空腔发生变形,导致异烟肼耐药.

关键词：结核分枝杆菌、katG基因、异烟肼、耐药性

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分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目81460315;江西省科技厅自然科学基金20142BAB205010

在线出版日期：2019-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：487-492,497