10.3969/j.issn.1002-2694.2017.01.006
4种血清型登革病毒多表位重组抗原的表达及血清学初步评价
目的 在原核表达系统中对登革病毒包膜蛋白(E蛋白)和非结构蛋白1(NS1)融合的B细胞抗原表位进行表达、纯化及血清学评价.方法 将B细胞抗原表位用形成α螺旋的连接肽(EAAAK)2作为接头,串联合成1条全新的多表位融合重组基因rE,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21 (DE3)后经IPTG诱导表达融合蛋白,用镍柱对重组蛋白纯化,并用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达产物.以融合蛋白为抗原,用间接ELISA检测登革热病人血清IgM抗体.结果 重组表达载体pET28a-rE构建成功,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达.融合蛋白主要以包涵体形式存在,用镍柱纯化获得高纯度的目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果显示蛋白分子量大小与预期结果相符,建立的间接ELISA具有较高的准确性.结论 原核表达的登革病毒多表位融合蛋白具有良好的血清学检测价值.
登革病毒、抗原蛋白、原核表达、血清学评价
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R373.3(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
2017-04-21(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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