弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ真核表达质粒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建弓形虫核苷三磷酸水解酶-Ⅱ (NTPase-Ⅱ)基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ并在COS-7细胞中进行瞬时表达.方法 以pBAD-HisB-NTPase-Ⅱ质粒为模板,PCR扩增NTPase-Ⅱ目的基因,将其克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,双酶切及测序鉴定重组质粒.阳离子脂质体法转染COS-7细胞并经SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白的表达.结果 经鉴定,弓形虫pcDNA3.1(+)-NTPase-Ⅱ核酸疫苗质粒构建成功.以脂质体法转染COS-7细胞后,转染细胞可成功地表达弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白.结论 证实了弓形虫NTPase-Ⅱ蛋白能在真核细胞中表达,为该基因的核酸疫苗研究提供了实验依据.

关键词：刚地弓形虫、核苷三磷酸水解酶、真核表达

所属期刊栏目：31

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：浙江省科技厅公益性项目2014C33161;温州医科大学学生科研项目wyx201301011;the Fund of Science and Technology of Zhejiang Province2014C33161;the Student Scientific Research Project of Wenzhou Medical Collegewyx201301011

在线出版日期：2015-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：519-521,526