副溶血性弧菌Vop T蛋白的表达及其抗体的毒力菌株特异性研究

摘要：

目的 研究副溶血性弧菌VopT蛋白的菌群特异性,为建立致病性副溶血性弧菌的快速检测方法以及探讨VopT的作用机制奠定基础.方法 根据副溶血性弧菌VopT蛋白基因(VPA1327)序列设计合成引物,通过PCR从副溶血性弧菌致病株WX06152(血清型O3:K6)中扩增出目的基因,构建原核表达载体pET-30a(+)-VPA1327并转化大肠杆菌BL21(DE3).经IPTG诱导表达,重组蛋白应用MALDI-TOF-MS/MS鉴定和His镍柱纯化,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清,建立副溶血性弧菌VopT蛋白的间接ELISA检测方法,并分析其敏感性和毒力菌株特异性.结果 成功表达了大小为33 kDa融合蛋白,肽指纹图谱与副溶血性弧菌VopT蛋白一致.重组VopT抗血清能够特异性检测副溶血性弧菌毒力株的全菌细胞及其裂解蛋白,与环境株及其它种属菌株无明显交叉反应,灵敏度达到105CFU·mL-1.结论 重组VopT的抗血清具有良好特异性,为探讨VopT致病机理和分泌机制研究提供了一定的参考依据.

关键词：副溶血性弧菌、VopT蛋白、原核表达、多克隆抗体、特异性

所属期刊栏目：31

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the Jiangsu Province Science and Technology Support ProgramBE2013733;the North Jiangsu Science and Technology Development Project No.BC2013438 江苏省科技支撑计划项目BE2013733;苏北科技发展计划项目BC2013438

在线出版日期：2015-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：441-446