基于GroEL基因的实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立及评价

摘要：

目的 建立一种敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,用于检测临床标本中的恙虫病东方体.方法 根据恙虫病东方体GroEL蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法.并从灵敏度、特异度、重复性及临床标本的检测能力等方面对本方法进行综合评价.结果 建立的实时荧光定量PCR方法具有良好的特异性,可检测出恙虫病东方体Gilliam、Karp、Kato和Kawasaki株.建立的标准曲线循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈现良好的线性关系(r=0.99),灵敏度分析显示样品最低检出浓度为21.8拷贝/μL.批内及批间重复性实验变异系数均小于1.5％,显示本方法具有良好的重复性.对本实验室保存的82份临床标本进行检测,并与常规巢式PCR方法比较,本方法检测出26份阳性标本中的25份,检出率为96.15％.结论 本研究建立的实时荧光定量PCR方法具有较高的敏感性、特异性和稳定性,可用于临床病人及暴发疫情的实验室快速检测.

关键词：恙虫病东方体、荧光定量PCR、GroEL蛋白基因、临床标本

所属期刊栏目：30

分类号：R376(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：the Jiangsu Province Health Development Project with Science and EducationZX201109 and RC2011085;the Special Fund for Preventive Medicine of Jiangsu ProvinceY2012093;“十二五”科教兴卫工程ZX201109和RC2011085;江苏省预防医学项目Y2012093

在线出版日期：2014-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1121-1124