禽流感病毒特异性 NP 单克隆抗体的鉴定及禽流感特异性检测方法的建立

摘要：

目的：筛选鉴定禽流感病毒特异性单克隆抗体（单抗）并建立一种适合禽源流感病毒特异性检测的抗原检测方法。方法利用分子进化树分析方法对甲型流感病毒核蛋白（NP）基因进行分类，从禽流感病毒分支和人流感病毒分支上各挑选一个代表性流感病毒株的NP基因进行重组抗原的表达及其单抗的筛选制备，最后应用免疫渗滤技术（A-Dot-ELISA）建立抗原快速检测方法。结果根据分子进化树分析结果确定禽流感H5N1病毒株HK/212/2003和人流感H1N1病毒株CA/04/2009的NP基因进行原核表达，获得高纯度的禽流感病毒NP重组抗原rNP-HK/212和人流感病毒NP重组抗原rNP-CA/04；利用上述两种NP抗原制备出抗rNP-HK/212单抗53株，通过差异筛选获得只对禽流感病毒NP蛋白rNP-HK/212有特异性反应而不与人流感病毒NP反应的3株单抗（1F2，5D2及25A2）；免疫荧光方法证实1F2等3株单抗只特异识别禽流感病毒；利用单抗1F2成功建立一种适于禽流感病毒特异性检测的抗原快速检测方法AIV-Dot-ELISA，该方法对病毒滴度为0．025～0．1HAtiter的19个不同亚型的禽流感病毒均能检出，对病毒滴度为5HAtiter的8个人流感病毒和2个乙型流感病毒的检测均为阴性。结论本研究成功制备出禽流感病毒NP蛋白特异性单抗，并建立了一种仅特异识别禽流感病毒的抗原快速检测方法AIV-Dot-ELISA，为快速鉴别禽类流感病毒和人类流感病毒感染提供了一种有用的分析检测工具。

关键词：甲型流感病毒、核蛋白、单抗、Dot-ELISA、快速检测试剂

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：“重大新药创制”国家科技重大专项No ．2011ZX09102-009-12；国际科技合作项目No ．2012DFH30020；国家863项目．2012AA02A307;the National Science and Technology Major Projects for “Major New Drugs Innovation and Development”．2011ZX09102-009-12;the International Scientific and Technological Cooperation Projects．2012DFH30020;the Na-tional High-Tech Research and Development Program ＂863＂Program of China．2012AA02A307

在线出版日期：2014-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：777-781,786