刚地弓形虫MIC2与醛缩酶作用位点的鉴定

摘要：

目的：确定刚地弓形虫微线体蛋白2（M IC2）与醛缩酶的作用位点。方法利用定点突变技术，将M IC2羧基端（MIC2C）的767位色氨酸（W767）突变为丙氨酸（A）。PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段；构建MIC2C W/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统，IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白。分别以该蛋白和GST-MIC2C蛋白（对照蛋白）作为探针蛋白与弓形虫速殖子裂解液进行GST pull-down实验，SDS-PAGE及Western blot分析。结果获得了MIC2C W/A突变体基因片段，制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白；GST-MIC2C蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带，而且可以被醛缩酶抗体识别，而GST-MIC2C W/A蛋白的pull-down产物中未见蛋白条带。结论将MIC2的W767突变为A后，MIC2失去与醛缩酶的作用，即M IC2与醛缩酶的作用位点为色氨酸（W ）。

关键词：刚地弓形虫、微线体蛋白2、醛缩酶、点突变、GST pull-down

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：河南省科技攻关计划项目No ．112102310209；河南省教育厅自然科学研究项目No ．2012B310019；新乡医学院博士科研启动基金2010

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：698-700,708