结核分枝杆菌CFP32蛋白的原核表达及其细胞免疫学检测价值评价

摘要：

目的 克隆、表达与纯化结核分枝杆菌CFP32蛋白,并对其进行细胞免疫学特性评价.方法 PCR扩增cfp32基因片段,与pET-30a(+)构建重组表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,对融合蛋白进行纯化,ELISPOT试验测定其细胞免疫应答,通过牛结核外周血IFN-γ释放试验,评价其作为刺激原的能力.结果 构建了正确基因序列的重组质粒,并在BL21(DE3)中高效可溶性表达,融合蛋白大小为32 ku,纯度达91.8％. ELISPOT显示CFP32蛋白刺激机体分泌IFN-γ和IL-4的细胞数相当,呈现Th1/Th2的平衡.在牛结核外周血IFN-γ释放试验中,其阳性符合率和阴性符合率分别为40％和73.3％,与牛型PPD刺激结果的相关系数为0.684.结论 成功构建CFP32蛋白重组表达菌,该蛋白引起的免疫应答趋向于Th1/Th2的平衡,并且有作为刺激原用于牛结核病检测的潜力.

关键词：结核分枝杆菌、CFP32蛋白、细胞免疫、刺激原

所属期刊栏目：30

分类号：R378.91+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家“973”项目2012CB518805;国家公益性行业科研专项200903027;江苏省农业三新工程SXGC[2012] 402;江苏高校优势学科建设工程资助项目联合资助;the National Basic Research and Development Program of China2012CB518805;the National Department Public Benefit Research Foundation200903027;the Jiangsu Three Novel Engineering Foundation of AgricultureSXGC[2012]402;the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions

在线出版日期：2014-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：578-582