Real-Time PCR检测棘阿米巴方法建立及应用

摘要：

目的 采用TaqMan探针法建立检测棘阿米巴18s rDNA的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,为早期诊断棘阿米巴病提供基因诊断标准方法.方法 提取实验室培养的4株土壤中分离的和1株水中分离的不同基因型棘阿米巴DNA,测序后在物种保守区域设计Real-time引物和TaqMan探针,用建立的方法检测动物模型兔眼分泌物、大肠杆菌、人巨细胞病毒、卡式肺孢子虫、疑似棘阿米巴角膜炎160例病人眼分泌物.结果 与传统实验室培养病原相比,所建立的qPCR检测棘阿米巴角膜炎方法测定大肠杆菌、人巨细胞病毒和卡式肺孢子虫与该研究的实验室分离棘阿米巴物种没有交叉反应,检测结果均为阴性.而160例疑似病人,用培养法检测出感染棘阿米巴患者为5例,用qPCR方法检测出6例,其中5例为培养法测出患者,qPCR方法检测阳性率(3.75%)略高于普通培养法(3.13%),但无统计学意义(P>0.05).qPCR方法在95%置信区间中灵敏度100%(47.95%~100%)高于普通培养法83.33%(36.10%~97.24%).结论 所建立测定棘阿米巴18s rDNA的Real-time PCR基因检测方法具有无创伤性、高效、特异、经济等特点,适用于疑似棘阿米巴角膜炎病人门诊筛选的有效方法.

关键词：棘阿米巴、TaqMan探针、18s rDNA、Real-time、PCR、qPCR

所属期刊栏目：30

分类号：R382(医学寄生虫学)

资助基金：浙江省自然科学基金Y2080973;温州市科技局Y20090012

在线出版日期：2014-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：158-162