细粒棘球绦虫GAPDH蛋白的生物信息学分析及其重组表达纯化和酶活性检测

摘要：

目的 以生物信息学预测细粒棘球绦虫甘油醛3-磷酸脱氢酶(EgGAPDH)编码基因及其编码蛋白的结构和功能,利用大肠杆菌原核表达系统高效表达EgGAPDH重组蛋白,体外检测其酶活性.方法 运用各软件对EgGAPDH的理化性质、保守功能域、系统发生树和二级结构、三级结构等方面进行分析后,将EgGAPDH基因亚克隆于表达载体pET30a(+),转化入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,表达、纯化重组蛋白,并利用底物3-磷酸甘油醛测定重组蛋白EgGAPDH的酶催化活性.结果 EgGAPDH cDNA序列长度为1 011 bp,编码一个336个氨基酸的蛋白.该GAPDH蛋白理论相对分子质量为36 128.3 Da,等电点为8.44,具有GAPDH蛋白家族的两个功能结构域,富含6种类型的特定功能位点.成功构建的原核表达载体pET30a(+)-EgGAPDH在E.coli BL21(DE3)中高效表达,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清,制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活检测显示其具有高效酶活性.结论 EgGAPDH基因可在原核系统中获得有酶催化活性的高效表达,为进一步研究其在糖代谢中的功能奠定了基础.

关键词：细粒棘球绦虫、甘油醛3-磷酸脱氢酶、生物信息学、原核表达、酶活性检测

所属期刊栏目：30

分类号：R383.3(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然基金资助项目81171632

在线出版日期：2014-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：125-129