猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备

摘要：

目的 构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清.方法 全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况；亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清；ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性.结果 全基因扩增出393 bp的TSOL 18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中；SDS PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41 kDa,经亲和层析后可获得纯度为75％的重组蛋白；ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应.结论 猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础.

关键词：猪带绦虫、TSOL18、重组蛋白、抗血清、制备

所属期刊栏目：29

分类号：R383.33(医学寄生虫学)

资助基金：the National Natural Science Foundation of China81160206;the Social Research Project of Science and Technology Department of Guizhou ProvinceSY[2011]3038;国家自然科学基金81160206;贵州省科技厅社会攻关项目黔科合SY字[2011]3038号

在线出版日期：2013-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：977-980,985