黄病毒属病毒RT-heminested-PCR方法的建立并用于蚊虫检测

摘要：

目的 建立适合检测蚊虫携带黄病毒属病毒通用引物反转录半巢式PCR(RT-heminested-PCR)方法.方法 根据GenBank黄病毒属病毒非结构蛋白基因(nonstructuralproteins gene) NS5序列,在保守区设计2对(3条)黄病毒属病毒通用引物,以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV) cDNA、登革病毒(Dengue virus,DENV)Ⅰ～Ⅳ型cDNA为模板优化条件建立RT-heminested-PCR方法；以日本脑炎病毒减毒活疫苗(SA14-14-2 strain)测定该方法的敏感度,并用于野外采集蚊虫检测.结果 在50只淡色库蚊中RT-heminested-PCR方法检测减毒活疫苗JEV最低检出浓度为1×10-2 PFU/mL.用该方法检测云南省普洱市采集的54组(540只)蚊虫,扩增产物经测序确认9组含有乙型脑炎病毒、3组含有登革病毒Ⅱ型、1组合有登革病毒Ⅰ型、1组含未报道的黄病毒属病毒,该病毒与Quang Binh virus同源性最高.结论 黄病毒属病毒通用引物RT-heminested PCR方法适合于蚊虫种群黄病毒属病毒监测.其不但适应已知黄病毒属病毒的检测,而且具备检测新型黄病毒属病毒的潜能.

关键词：RT-heminested PCR、蚊虫、黄病毒属病毒

所属期刊栏目：29

分类号：R348.11(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：the National Science and Technology Major Program.2012ZX10004-220 & 2008ZX10004-011;国家科技重大专项2012ZX10004-220,2008ZXL0004-011

在线出版日期：2013-10-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：653-658