屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的研究

摘要：

目的 建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法.方法 根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的 基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性.结果 在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线.建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管.通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%.应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100~1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL.结论 本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法.

关键词：屎肠球菌、TaqMan荧光定量PCR、标准曲线

所属期刊栏目：29

分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技重大专项No.2011ZX10004-001,No.2012ZX10004-501卫生科研行业专项201302006

在线出版日期：2013-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：551-555