登革Ⅱ型病毒E蛋白Ⅰ、Ⅱ结构域在大肠杆菌中的表达及免疫反应性鉴定

摘要：

目的 在大肠杆菌中表达登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白(E)的第一,二结构域(DⅠ/Ⅱ)并进行免疫反应性鉴定.方法 登革II型病毒接种乳鼠,提取总RNA,经RT-PCR扩增目的 基因片段.双酶切PCR纯化产物和质粒pET-28a(+)并连接构建重组质粒pET28a- DV2-E-D1&2.筛选阳性菌落,提取质粒并转化感受态细胞,IPTG诱导表达目的 蛋白并进行SDS-PAGE分析,Western blot 鉴定.结果 RT-PCR扩增得到约900 bp的目的 基因片段,双酶切及测序分析表明,插入序列正确且开放读码框正确.重组菌诱导后在37 kD位置有明显的诱导后表达带,其大小与预测值一致.经12%SDS-PAGE分析,显示重组蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;Western blot结果 显示重组蛋白与His·Tag单抗和登革病毒单抗(D1-11)均发生反应.结论 成功地在大肠杆菌中表达登革II型病毒包膜糖蛋白(E)的DⅠ/Ⅱ,免疫反应性鉴定结果 表明其具有良好的免疫反应性.

关键词：登革病毒、E蛋白、第I-II结构域、表达、免疫印迹

所属期刊栏目：28

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30872198,30972566

在线出版日期：2012-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：425-428