多重荧光定量PCR甄别3种霍乱弧菌相关毒素基因

摘要：

目的 为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法.方法 针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方法对鉴定结果进行验证.结果 建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因,不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果.菌体检测的最低检出限度ctxA基因:102 CFU/mL,ace基因和zot基因:10 CFU/mL.构建了3种毒素相关基因阳性质粒,ace基因和zot基因的最低检出限度为10 copies/μL,ctxA基因的最低检出限度为102 copies/μL,定量检测批间和批内的变异系数均小于5％；对70株霍乱弧菌分离株进行评价,结果显示其中40株(57.2％)携带ctxA毒素基因、31株(44.3％)携带ace毒素基因、46株(65.7％)携带zot毒素基因,通过测序方法验证,符合率达到100％.结论 本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高,为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具.

关键词：多重实时荧光定量PCR、霍乱弧菌、毒素

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分类号：R378.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金："艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项""传染病检测技术研究-传染病病原体诊断和组合检测技术"课题2008ZX10004-002;"霍乱弧菌核酸快速甄别方法研究及分子分型数据库的建立"课题2010KYB110

在线出版日期：2012-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1065-1070