绵羊肺腺瘤病毒的巢式RT-PCR技术检测

摘要：

目的 为能够更加准确、敏感的检测绵羊肺腺瘤病(sheep pulmonary adenomatosis SPA).方法 本试验通过外源性绵羊肺腺瘤病毒的囊膜基因env的TM区和长末端重复序列LTR的U3区分别设计特异性的内外侧引物,运用巢式RT-PCR的方法 进行检测,同时与普通RT-PCR进行比较.结果 测得的绵羊肺腺瘤病毒的env基因和U3区序列与Gen-Bank中发表的外源性绵羊肺腺瘤病毒基因序列(AF105220)同源性分别为100%和98%.特异性试验结果 表明本试验设计的env基因和LTR的U3区的内外侧引物不能从健康绵羊、小鼠、家兔的肺组织以及感染了SPA羊的肾、肝、脾的RNA中扩增出条带.敏感性试验结果 表明,env基因和LTR的U3区的巢式RT-PCR诊断方法 最低能检测出的标准模板RNA量分别为48fg和48 pg,而普通的RT-PCR,env基因及LTR的U3区的最低检出量分别为0.48 ng和4.8 ng.得出巢式RT-PCR的敏感性高于普通RT-PCR,同时env基因的敏感性高于LTR的U3区的敏感性.结论 以上试验说明巢式RT-PCR技术对于检测绵羊肺腺瘤病具有很高的敏感性和实用性.

关键词：绵羊肺腺瘤病、绵羊肺腺瘤病毒、巢式RT-PCR

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分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30960271,30760178;内蒙古科技创新引导基金联合资助

在线出版日期：2011-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：547-551