猪附红细胞体ORF4基因片段的人工合成及基因表达

摘要：

目的 本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达.方法 选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR-based accurate synthesis(PAS)法进行人工合成.经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21(DE3),在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS-PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段.结果 结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21～22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点.结论 ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用.

关键词：猪附红细胞体、ORF4、全基因合成、表达

所属期刊栏目：27

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：中国博士后基金特别资助200801417;山东省博士后创新项目专项基金资助200801001;山东省博士后基金资助76247;山东省中青年科学家奖励基金BS2009NY007

在线出版日期：2011-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：287-290