HIV-1 Vif的克隆、表达与活性检测

摘要：

目的 克隆HIV-1 Vif基因,构建原核表达质粒,进行蛋白的表达及其生物学活性的检测.方法 PCR扩增Vif基因,并将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)/Vif,进行双酶切及测序鉴定.获得的阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析,利用亲和层析方法纯化Vif蛋白.利用Pull-Down方法检测HIV-1 Vif与SH3(HCK)特异性结合活性.结果 通过酶切和测序,结果表明重组质粒pET28a(+)/Vif构建正确.SDS-PAGE和Western blot结果鉴定了原核表达的Vif重组蛋白大小正确.纯化了蛋白Vif、SH3和GST.GST pull-down试验说明Vif和SH3蛋白具有体外特异性结合活性.结论 成功地克隆、表达和纯化了Vif蛋白,Vif与SH3蛋白具有结合活性,为进一步研究针对Vif与SH3结合的药物筛选提供实验依据.

关键词：HIV-1、Vif、SH3(HCK)、结合

所属期刊栏目：26

分类号：R392.11

在线出版日期：2011-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1141-1144