猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达

摘要：

目的 获得研发A型猪流感病毒ELISA检测试剂盒和制备NP蛋白单克隆抗体的抗原物质.方法 根据已报道的猪流感病毒H1N1亚型NP基因序列(GenBank登录号:GQ422386)人工合成NP基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将NP基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切、测序鉴定后,获得携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP.该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒Bacmid-NP.在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白.结果 通过SDS-PAGE和Western blotting分析表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为57KD.结论 实验结果表明已成功构建了携带NP基因的重组质粒pFastBacHTB-NP和转座的杆粒Bacmid-NP,转染后在sf9昆虫细胞上成功的表达.

关键词：H1N1、NP基因、杆状病毒表达载体、昆虫细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：云南省社会发展科技计划2009ZC189M

在线出版日期：2011-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1118-1122