日本血吸虫新基因Sjnanos的克隆、表达及免疫保护效果评估

摘要：

目的 扩增、表达日本血吸虫Sjnanos编码基因并评估其重组蛋白诱导的免疫保护效果.方法 从42d龄的日本血吸虫成虫中扩增了一个日本血吸虫性别差异表达的基因,GenBank登录号为AY814948,并对其进行生物信息学分析.将该基因亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清特异性抗体效价,蛋白印迹分析检测其抗原性,以看家基因NADH为内参,应用荧光定量PCR技术分析该基因在血吸虫各个阶段的表达状况.结果 同源性分析表明,该基因为日本血吸虫的一个新基因,其编码序列的开放阅读框(ORF)为525bp , 编码174个氨基酸,理论相对分子量为19.9,PI为8.2.荧光定量PCR技术分析显示该基因在7d、13d、18d、23d、32d、42d虫体均有表达,但在18d和13d虫体的表达量明显高于其他天数的虫体,在雄虫的表达量高于雌虫.成功构建了该基因的重组表达质粒pET28a(+)-Sjnanos,并在大肠埃希菌中获得表达,Western-blot分析表明重组蛋白具有较好的免疫原性,动物免疫保护试验获得了31.4%的减虫率和53.8% 的肝脏减卵率.结论 获得日本血吸虫新的抗原基因Sjnanos,该基因的重组蛋白在小鼠中诱导了部分免疫保护作用.

关键词：日本血吸虫、nanos基因、抗原性、免疫保护

所属期刊栏目：26

分类号：R383.2(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30671581;973课题2007CB513108;863计划2006AA10A207

在线出版日期：2010-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：631-637