嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测

摘要：

目的 确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR.方法 通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域.根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列.根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测.结果 研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面.不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%.在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,最高达4.3倍(P<0.05).基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌.结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断.

关键词：嗜肺军团菌、lvgA基因、实时荧光定量RT-PCR

所属期刊栏目：26

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：金华市科技计划项目2009-3-053

在线出版日期：2010-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：546-550