狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用

摘要：

目的 以狂犬病病毒P蛋白作为检测抗原,用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体.方法 根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)LEP-Flury株的基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增出P基因的全长序列,克隆于pGM-T载体中,获得重组质粒pGM-T-P,将重组质粒用限制性内切酶NotI和EcoRI进行双酶切,酶切产物定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a-P,阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western-blot分析确定蛋白表达量和特异性.用纯化的蛋白作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步将间接ELISA方法应用于狂犬病病毒抗体的检测中.结果 扩增RV P基因,构建了克隆质粒pGM-T-P、原核表达质粒pET-32a-P,高效表达了主要以可溶性形式存在的P蛋白,并能与RV阳性血清发生特异性反应.用表达的狂犬病病毒重组P蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法.结论 成功表达了磷蛋白,用其作为固化抗原以间接ELISA方法检测RV抗体.

关键词：狂犬病病毒LEP-Flury株、P基因、P蛋白、原核表达、间接ELISA

所属期刊栏目：26

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划"863"计划2008AA10Z411;中央级公益性科研院所基本业务费专项0032007008;北京市科委基金项目Z07010501 780701;国家农业行业公益项目2008-3;联合资助

在线出版日期：2010-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：163-167