10.3969/j.issn.1002-2694.2010.02.010
隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统的构建及鉴定
目的 获取隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30基因,并构建原核表达系统,获得相应的重组蛋白.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术,从微小隐孢子虫基因组中扩增出p30基因,然后将其克隆入pMD18-T载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切和测序鉴定,并进行生物信息学分析及预测.再将亚克隆与表达载体PET-28 a (+)分别酶切并连接,经IPTG诱导表达,表达产物用Ni-NTA亲和层析法纯化,SDS-PAGE和Western blotting检测表达效果.结果 PCR扩增得到特异的微小隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30基因,测得的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与GenBank上提交的序列同源性分别为98%~100%和99%~100%,理论等电点和分子量分别为6.4854和31 842Da,并存在9个潜在的抗原表位.经酶切、测序结果表明质粒已导入Rosetta.SDS-PAGE和Western blotting证实重组菌成功表达融合蛋白.结论 成功构建微小隐孢子虫Gal/GalNAc特异性凝集素p30原核表达系统.
隐孢子虫、p30基因、克隆、原核表达
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R382(医学寄生虫学)
浙江省科技厅科研基金资助项目2006C34005;温州市科技局科研基金H20060025
2010-04-14(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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