10.3969/j.issn.1002-2694.2010.01.019
牛冠状病毒N基因的原核表达及初步应用
目的 获得牛冠状病毒N基因的全长序列,实现N基因在大肠杆菌中的高效表达,并进行初步应用.方法 根据已发表的牛冠状病毒Mebus株的序列设计引物,对BCV-DQ株进行RT-PCR扩增、克隆和测序;将该基因插入到原核表达载体pET-30a (+)上进行原核表达,SDS-PAGE 和Western blot检测;用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立ELISA检测方法,对部分临床样本进行检测.结果 BCV-DQ株N基因全长1 347bp,与GenBank已发表的6株BCV的N基因相比较,核苷酸同源性98.3%以上.构建的重组质粒pET-N能表达出一条大小约为60 ku的蛋白,且能与鼠抗BCV血清发生特异性反应.用建立的ELISA方法对黑龙江不同地区送检的共256份牛血清样品进行检测,结果阳性率65.23%,与病毒中和试验的符合率达95.31%.结论 BCV N基因保守性很高,并在原核表达系统中获得了高效表达,其表达产物具有良好的免疫反应原性.临床检测结果表明N蛋白可作为诊断抗原用于牛冠状病毒病的流行病学调查.
牛冠状病毒、N基因、克隆、序列分析、原核表达
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S852.65(动物医学(兽医学))
黑龙江农垦总局攻关课题HNKXIV-08-07
2010-03-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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