CYP3A29稳定表达HepG2细胞株的建立及其硝苯地平代谢活性鉴定

摘要：

目的 建立稳定表达Bama小型猪CYP3A29的HepG2细胞株.方法 通过总RNA提取、经RT-PCR得到Bama小型猪CYP3A29的基因,并将此基因克隆至亚克隆载体PMD18-T上得到重组质粒pMD-3A29;以测序正确的重组质粒pMD-3A29为模板,采用PCR扩增CYP3A29基因并在其3′添加组氨酸标签,扩增产物经 BamHI/XhoI双酶切,将带有组氨酸标签的CYP3A29基因定向克隆至pcDNA3.1(+)中,并测序验证;将测序正确的CYP3A29基因通过脂质体转染至HepG2细胞,G418筛选10代,经RT-PCR及Western-blot分析及探针药物硝苯地平对重组细胞进行活性鉴定.结果 与HepG2相比,HepG2-CYP3A29细胞株具有极显著的硝苯地平氧化活性.结论 成功建立了稳定表达CYP3A29的HepG2细胞株,可用于相关药物代谢研究.

关键词：巴马小型猪、CYP3A29同工酶、HepG2、逆转录酶PCR、Western-blot、硝苯地平

所属期刊栏目：25

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家"十五"科技攻关计划重点项目资助课题2004BA717B23

在线出版日期：2009-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：640-644,649