结核分枝杆菌Ag85B与ESAT6融合蛋白的表达、纯化及抗原活性的初步研究

摘要：

目的 将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与ESAT6在大肠杆菌中融合表达,并对其进行纯化、鉴定和免疫学特性的初步研究.方法 采用PCR方法 从MTB毒株H37Rv基因组DNA中扩增Ag85B和ESAT6基因,并在两基因中引入48bp的柔性linker结构,以确保两蛋白的正确折叠.将各目的 片段克隆至pMD18-T载体中进行测序.将测序正确的目的 基因片段双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EXHTa,得到重组质粒pPROEXHTa-Ag85B-ESAT6,并转化入大肠杆菌DH5α.经IPTG 诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B和抗ESAT6的mAb进行Western blot分析鉴定.通过镍柱对融合蛋白进行纯化.在PBS中通过透析恢复重组蛋白的天然结构,将复性融合蛋白与8例临床可疑结核病人血清进行ELISA测定.结果 PCR法扩增获得的各目的 基因片段与GenBank报道的一致.构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE 分析显示重组质粒在原核系统中得到了表达.融合蛋白能够分别与抗Ag85B和抗ESAT6的mAb反应.该融合蛋白主要以包涵体的形式存在,镍柱亲和层析纯化后得到了高纯度的Ag85B-ESAT6融合蛋白,并能够与结核病人血清发生反应.结论 结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-ESAT6在大肠杆菌中得到了高效表达,为进一步研究其免疫原性和保护性提供了基础.

关键词：Ag85B、ESAT6、柔性链、融合蛋白、原核表达、纯化

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分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金项目30670116;陕西省自然科学基金项目2006C218

在线出版日期：2009-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：449-452