Taqman-MGB双重探针PCR技术检测军团菌

摘要：

目的 建立同时检测军团菌属和嗜肺军团菌的双重荧光定量PCR方法.方法 利用军团菌16S rDNA和mip基因的特异性序列设计引物和MGB探针,两条探针5′端分别标记FAM和HEX,3′端标记MGB.优化了荧光定量PCR反应条件和反应体系,并对军团菌、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其它细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性.结果 该方法所检测菌株中军团菌属结果均为16S rDNA阳性(LP12、LP13除外);嗜肺军团菌均为mip阳性,非嗜肺军团菌属除L.micdadei外均为阴性;而非军团菌菌株16S rDNA和mip检测结果均为阴性.检测灵敏度达10个拷贝/反应;重复性实验中,变异系数为0.2%～0.6%;从菌株核酸的提取至检测完成仅需2h左右.结论 本文建立的TaqMan-MGB双重探针荧光定量PCR是一种定量检测军团菌的特异、快速、敏感的方法,可区分嗜肺与非嗜肺军团菌属,该方法的建立将有益于今后开展对外环境污染源进行初步卫生学调查与评估,以及应急临床标本的快速定量检测.

关键词：军团菌、双重荧光定量PCR、MGB探针、16S rDNA基因、mip基因

所属期刊栏目：25

分类号：R379(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2009-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：174-178