幽门螺杆菌VacA N端真核表达载体的构建、鉴定及其诱导巨噬细胞空泡化和凋亡的观察

摘要：

目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)空泡毒素(Vacuolating cytotoxin,VacA)基因的真核表达载体pDsRed-Monomer-C1/vacA,并在THP-1巨噬细胞中表达,为研究VacA单一毒力决定簇的致病性奠定实验基础.方法 用Primer 5.0软件设计引物,以HP基因组为模板,PCR扩增vacA目的基因片段,克隆入真核表达载体pDsRed-Monomer-C1中,经酶切、PCR鉴定及测序鉴定后,转染 THP-1巨噬细胞中,荧光显微镜和Western-blot检测VacA蛋白在细胞中的表达;电镜观察巨噬细胞(MΦ)的空泡样变和凋亡;流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 PCR扩增得到了大小约为1 428bp的目的片段,双酶切及测序鉴定证明成功构建了HP真核表达重组载体;转染后24h,重组质粒组部分细胞中有聚集的荧光颗粒,部分细胞发生空泡样变和凋亡改变;细胞凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P＜0.001),细胞核因子-κB(nuclear factor kappaB,NF-κB)的抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制细胞的凋亡.结论 VacA蛋白瞬时高表达促进THP-1巨噬细胞空泡样变和凋亡.NF-κB可能参与调节VacA诱导的巨噬细胞凋亡.

关键词：幽门螺杆菌、空泡毒素、巨噬细胞、凋亡

所属期刊栏目：24

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：湖南省自然科学基金06JJ2093;湖南省教育厅科研项目05C471

在线出版日期：2008-06-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：352-355