H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备

摘要：

目的 制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体.方法 以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板, PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus (DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达.采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性.结果 与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础.

关键词：H5N1 A型流感病毒、核蛋白NP、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：24

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z463

在线出版日期：2008-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：202-204,209