问号钩端螺旋体fliN基因原核表达及其产物的鉴定

摘要：

目的 克隆问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株鞭毛相关基因fliN并构建其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫性.方法 提取钩体株基因组DNA,高保真PCR扩增全长fliN基因片断,T-A克隆后测序.按常规方法 构建fliN基因原核表达系统,并用IPTG诱导目的 重组蛋白rFliN表达.采用SDS-PAGE结合Bio-Rad凝胶图象分析系统检测rFliN表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rFliN.采用兔抗问号钩体黄疸出血群赖株全菌抗血清的Western blot鉴定rFliN及其免疫反应性.结果 与报道的相应序列比较,所克隆的fliN基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.IPTG诱导原核表达系统pET32a-fliN-E.coliBL21DE3的rFliN表达量约占细菌总蛋白的30%,rFliN提纯后仅见单一的蛋白条带.rFliN能与抗血清发生免疫结合反应.结论 本研究成功地构建了高效表达目的 重组蛋白的问号钩体fliN基因原核表达系统,RFliN有良好的免疫反应性,为深入研究FliN致病及免疫保护作用奠定了基础.

关键词：问号钩端螺旋体、fliN基因、克隆、原核表达、鉴定

所属期刊栏目：24

分类号：R377(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30370072

在线出版日期：2008-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：30-32,62