霍乱弧菌肠毒素B亚单位基因在大肠杆菌和双歧杆菌的表达

摘要：

目的 构建霍乱弧菌肠毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)基因的大肠杆菌表达重组质粒,并观察其在大肠杆菌和双歧杆菌中的表达.方法 从pBI121质粒PCR扩增获得CTB基因片断,克隆到大肠杆菌载体pGEX-4T-1上,构建重组质粒,然后转化大肠杆菌DH5α和双歧杆菌.转化菌经IPTG诱导,然后用SDS-PAGE和Western blot方法鉴定表达的重组蛋白.结果 构建了重组质粒pGEX-4-CTB,CTB基因片段分子量约为376bp;在大肠杆菌中表达出35kD的霍乱弧菌B亚单位融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子量与文献相符,表达的蛋白约占细菌总蛋白的10%;在双岐杆菌中也能得到正确表达,表达量较大肠杆菌低,占细菌总蛋白约5%.Western blotting结果确认了该条带为CTB基因的产物.结论 构建的重组质粒pGEX-4T-CTB能够在大肠杆菌及双歧杆菌中获得表达.

关键词：霍乱弧菌肠毒素B亚单位、双歧杆菌、大肠杆菌、基因克隆、表达

所属期刊栏目：23

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2007-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：168-171