大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究

摘要：

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A, LTA)基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统,探讨重组LTKA63(rLTKA63)粘膜免疫佐剂活性的机制.方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因,利用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序.采用无His-tag的原核表达载体pET-15b,构建LTKA63原核表达系统,通过SDS-PAGE鉴定表达产物.采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径.结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带.与报道的LTA序列比较,所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.03%～99.61%和98.33%～99.22%.LTA基因定位突变后获得序列正确的LTKA63突变体.rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15%左右.rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21.9%和36.2%.结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统,所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞.

关键词：大肠杆菌、LTKA63基因、克隆/表达载体构建、重组蛋白/表达、粘膜免疫/佐剂活性、Th1/Th2

所属期刊栏目：22

分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2006-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：107-110