单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法建立及应用

摘要：

目的通过扩增hly基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌(Lm)方法.方法:用PCR法扩增hly基因来检测标准菌株及临床分离的Lm的纯培养物和模拟污染的生猪肉、水和牛奶,并应用于实际食品检验工作中进行验证.结果 34株Lm的PCR结果呈阳性,而其它李斯特菌,包括英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌、威儿李斯特菌和格氏李斯特菌以及非李斯特菌均未出现特异性的片段.表明所扩增的hly基因3'末段827bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性.PCR法对Lm纯培养物的检测限达105 CFU/ml,对模拟污染生猪肉、水和牛奶的30℃16h改良LEB增菌培养液用PCR法检测,结果检测限达10 CFU/25g(ml).进一步研究表明该PCR扩增体系能检测出6.5pg的Lm DNA,整个检测过程只需24h.采用该法对扬州市区169份食品样品检测,8份样品Lm呈阳性且结果与传统的生化鉴定方法完全一致.结论扩增hly基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品的Lm的分离.

关键词：单核细胞增生性李斯特菌(Lm)、快速检测、PCR

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分类号：R378.99(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划175;江苏省六大人才高峰基金G-2002-026;江苏省科技攻关项目招标项目16

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：797-800