日本血吸虫PA28亚单位蛋白的表达与鉴定、纯化及免疫反应性的评价

摘要：

目的将亚克隆在pET32a(+)质粒上的日本血吸虫蛋白酶体激活因子PA28亚单位基因进行表达及蛋白纯化,并对表达产物用Western-blot 及ELISA方法进行免疫反应性的评价.方法将重组表达质粒pET32a(+)-PA28 转化入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达后超声裂菌,离心后取上清进行SDS-PAGE,观察融合蛋白的表达情况;用Ni-NTA 柱子纯化目标蛋白;将SDS-PAGE后的蛋白从凝胶转移到PVDF膜上,分别用6-His抗体、日本血吸虫尾蚴感染6周的兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清作一抗进行免疫印迹,将纯化后的融合蛋白作为包被抗原,检测正常兔血清及感染兔血清,对该蛋白的免疫反应性作出评价.结果重组菌株用IPTG诱导后于48kDa处有一表达条带,该蛋白与硫氧还蛋白融合表达,带有6-His,用抗6-His抗体做免疫印迹有特异性的单一反应带,用尾蚴感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清做免疫印迹,结果显示该目的蛋白带与以上多抗具有敏感特异的反应条带.ELISA 的结果显示该蛋白与血吸虫感染兔血清具有较敏感特异的免疫反应性.结论 PA28蛋白与硫氧还蛋白融合表达后为可溶性蛋白且分子量约为48kDa,该蛋白与血吸虫感染兔血清及紫外照射减毒尾蚴免疫的兔血清具有较敏感特异的免疫反应性.

关键词：日本血吸虫、蛋白酶体激活因子PA28亚单位、表达、纯化、免疫印迹、ELISA

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分类号：R382.24;Q78(医学寄生虫学)

资助基金：联合国开发计划署/世界银行/世界卫生组织热带病研究和培训特别规划资助项目A00690,A00191

在线出版日期：2004-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：183-185,189