Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化

摘要：

目的从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆28kDa 谷胱甘肽-S-转移酶(Sj28GST)基因,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白28GST-TRX.方法应用引物特异性PCR技术,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj28GST基因,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后,采用定向克隆技术构建Sj28GST-TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)的表达,用Western-blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj28GST的免疫原性,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白.结果 Sj28GST PCR产物为约640bp,其碱基序列(633bp)和推导的氨基酸序列(211aa)与GenBank报道一致;获得了Sj28GST-TRX重组质粒;28GST-TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达;在分子量为约43kDa处有一能与羊抗Sj28GST抗体产生特异性反应的含28GST融合蛋白条带;包涵体纯化法结合Ni+亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白.结论获得到了日本血吸虫中国大陆株28GST分子的全长基因和高纯度重组28GST-TRX融合蛋白,该融合蛋白具有天然Sj28GST免疫原性.

关键词：日本血吸虫中国大陆株、28kDa谷胱甘肽-S-转移酶、分子克隆、包涵体、蛋白纯化

所属期刊栏目：20

分类号：R383.2(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金30271166

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：15-18