利用酵母双杂交系统筛选Vero E6细胞中与汉坦病毒核衣壳蛋白相互作用的基因

摘要：

目的利用酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)筛选VeroE6细胞中与汉坦病毒核衣壳蛋白(N蛋白)特异结合的蛋白质基因序列,研究汉坦病毒与其宿主细胞相互作用的机制.方法构建含N蛋白基因的"诱饵"质粒(pGBT9N)和含VroE6细胞基因片段的"猎物"质粒(PATC2).将两种质粒转入到酵母HF7c株,用选择培养基筛选带有两种质粒的克隆株,测定β-半乳糖苷酶(β-Gal)的活性确定pGBT9N质粒的存在.用PCR方法扩增克隆株中VroE6细胞基因片段,根据插入片段的长度及限制性内切酶酶切图谱对所筛选的克隆株进行分组、测序,从人的基因库中查找与插入片段相关的基因序列.结果在筛选出的克隆中,73.5%的克隆所插入的基因与已知的Ubiqutin(泛素)蛋白有很高的同源性(大于99%),l 6.2%的克隆所插入基因与鼠蛋白激酶有约72%的同源性.结论汉坦病毒N蛋白可能与VeroE6细胞中泛素蛋白以及某种蛋白激酶特异性结合,激发并产生某些信号传导,进而使病毒能利用宿主细胞完成其复制释放的功能.有关具体相互作用的机制还有待于进一步研究.

关键词：酵母双杂交系统、汉坦病毒、核衣壳蛋白

所属期刊栏目：18

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：48-50