结核分枝杆菌MPT-64分泌蛋白在原核表达载体中的克隆,表达与鉴定

摘要：

目的对结核分枝杆菌的一种分泌蛋白MPT-64基因进行克隆,鉴定与表达,为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用PCR法对基因MPT-64进行扩增,产物与载体质粒pGEX-4T-1构建表达MPT-64的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli DH5α内抽提质粒,酶切检验,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)PLysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫染色,一抗为结核分枝杆菌菌株H37Rv羊抗阳性血清.结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为50 000,抗体检测有特异带大小为50kDa.结论目的基因克隆到菌株内,重组结核杆菌分泌蛋白MPT-64的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及上述抗原、抗体的大规模制备打下基础.

关键词：结核分枝杆菌、分泌蛋白、载体、克隆、表达与鉴定

所属期刊栏目：18

分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4