牛凝乳酶原基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

摘要：

以实验室保存的携带凝乳酶原前体基因的重组载体pMD(R)19-T/bPPC为模板克隆凝乳酶原基因,经双酶切后与载体pET-30a连接得到重组载体pET-30a/bPC,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况.重组蛋白经变性/复性、DEAE-Sepharose Fast Flow纯化和自催化后检测凝乳活性.结果表明,重组凝乳酶原基因在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的68％,采用Arima K方法检测,其凝乳活力达到80 SU/mL.因此,通过大肠杆菌表达系统大量制备具有生物活性的重组牛凝乳酶原的策略是可行的,研究结果为弥补国内天然牛凝乳酶的短缺提供一种途径.

关键词：牛凝乳酶原、高效表达、大肠杆菌BL21(DE3)、凝乳活性

所属期刊栏目：40

分类号：Q93-33(微生物学)

在线出版日期：2012-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：4-6