小鼠破骨细胞前体细胞酵母双杂交筛选文库的构建

摘要：

目的 为研究巨噬细胞( Macrophage,M(ψ))细胞在形成破骨细胞时细胞膜膜蛋白的表达及相互作用机制.方法 C57BL/6小鼠长骨骨髓单个核细胞加入M-CSF和RANKL诱导形成破骨细胞,在M(ψ)细胞开始融合至形成破骨细胞的不同阶段开始收集细胞,提取总RNA,用CloneMiner TM cDNA文库构建试剂盒,采用Gateway非放射标记方法构建小鼠破骨细胞前体细胞全长cDNA文库及酵母表达文库,并将其转化酵母,观察其在酵母中的表达情况.结果 构建的小鼠骨髓破骨细胞前体细胞cDNA入门文库滴度为6×l06cfu/ml,库容量为3.5×107cfu,重组率为100％,重组子插入cDNA平均片段大小约为1.76kb.利用此入门文库构建的酵母表达文库,重组率100％,插入片段平均长度为1.82kb,绝大多数(87.5％)插入片段在1kb以上,酵母转化实验证实其可在酵母中完整表达.结论 Gateway非放射标记法构建的小鼠骨髓破骨细胞前体细胞cDNA入门文库和酵母表达文库均符合高质量文库要求,且可避免放射性物质的接触.

关键词：小鼠、破骨细胞、cDNA质粒文库、构建、鉴定

所属期刊栏目：11

分类号：R-331(医学研究方法)

资助基金：广州市医药卫生科技重点项目201102A212025

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1323-1326