SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达

摘要：

目的 构建癌蛋白SET与增强型绿色荧光表达栽体(EGFP)的融合表达质粒pEGFP-N2-SET并获得表达.方法 根据人SET基因序列.设计了一对含有Kozak序列、终止密码子、Hind Ⅲ和KpnⅠ酶切位点的引物.从人L-02肝细胞提取总RNA,以逆转录后eDNA为模板,PCR扩增获得SET基因片段,经双酶切后回收得到有以上两个酶切位点的SET基因片段,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pEGFP-N2载体中,获得重组质粒pEGFP-N2-SET.以Lipofectamine TM 2000为载体,将构建好的真核表达质粒转染到L-02肝细胞中进行瞬时表达.结果 经DNA测序鉴定证实,pEGFP-N2-SET重组质粒构建成功,经荧光倒置显微镜观察,证实能在细胞内进行蛋白表迭.结论 SET表达质粒的成功构建及表达为其进一步结构和功能研究奠定了基础.

关键词：癌蛋白SET、绿色荧光表达载体、蛋白磷酸酶2A

所属期刊栏目：8

分类号：R730.23(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30571557;广东省自然科学基金5009153

在线出版日期：2008-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：716-718