结核分支杆菌38KD蛋白基因克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的构建和克隆结核分枝杆菌38kD蛋白的基因,以转基因技术导入大肠杆菌,诱导表达,以获得大量38kD抗原. 方法根据GenBank上编码38kD蛋白的基因系列,设计一对特异引物,通过PCR技术从结核分支杆菌H37Rv基因扩增出38kD蛋白基因片段;目的基因连接到克隆载体pMD 18-T Simple Vector,测序鉴定,目的片段双酶切下来克隆到原核表达载体pET-30a中,成功构建成带有N末6His-tag的融合表达载体.表达载体用化学转化法转化E. coli BL21(DE3),用菌落PCR筛选得到阳性克隆;经1mmol/L IPTG诱导4h表达外源蛋白;而且在37℃时蛋白表达量最高;二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果. 结果 38kD序列与GenBank报道完全一致;用菌落PCR筛选得到阳性克隆;经1mmol/L IPTG诱导4h表达外源蛋白;而且在37℃时蛋白表达量最高;二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果显示,在大约38kD处有表达产物特异条带;可溶性分析表明,该重组蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在;纯化的包涵体纯度达到90%. 结论获得38kD蛋白工程菌株,为将此抗原用于临床诊断应用打下基础.

关键词：分支杆菌、38kD蛋白、克隆、表达

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分类号：R378.91(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2006-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1786-1789