PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

摘要：

目的：探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞，实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞，空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液，对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选，建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果应用G418筛选14 d，稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出，建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光，基因融合表达获得成功。稳转组细胞 PAX2条带密度与β-action 吸光度比值为（1.00±0.04），空载组为（0.83±0.03），对照组为（0.85±0.04），3组吸光度比值比较，差异有统计学意义（ F＝398.7，P﹤0.05）；其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组，差异均有统计学意义（ P﹤0.05）。细胞划痕后18 h，对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为（39.34±5.34）％、（40.56±7.54）％和（83.72±7.12）％，3组细胞迁移率比较，差异有统计学意义（ F＝431.8，P﹤0.05）；其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组，差异均有统计学意义（ P﹤0.05）。各组细胞培养48 h后，对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为（23.33±3.63）、（22.00±8.14）、（45.67±7.14），3组迁移细胞数比较，差异有统计学意义（ F＝248.5，P﹤0.05）；其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞，并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。

关键词：PAX2基因、细胞侵袭、细胞运动、肾小管、上皮细胞、大鼠

分类号：R692.6(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：辽宁省博士科研启动基金计划资助项目20141136

在线出版日期：2015-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4325-4329