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10.3969/j.issn.1007-9572.2015.35.013

PAX2稳转细胞系构建及对细胞迁移和侵袭能力的作用研究

引用
目的:探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞,实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞,空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液,对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选,建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果应用G418筛选14 d,稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出,建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光,基因融合表达获得成功。稳转组细胞 PAX2条带密度与β-action 吸光度比值为(1.00±0.04),空载组为(0.83±0.03),对照组为(0.85±0.04),3组吸光度比值比较,差异有统计学意义( F=398.7,P﹤0.05);其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组,差异均有统计学意义( P﹤0.05)。细胞划痕后18 h,对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为(39.34±5.34)%、(40.56±7.54)%和(83.72±7.12)%,3组细胞迁移率比较,差异有统计学意义( F=431.8,P﹤0.05);其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组,差异均有统计学意义( P﹤0.05)。各组细胞培养48 h后,对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为(23.33±3.63)、(22.00±8.14)、(45.67±7.14),3组迁移细胞数比较,差异有统计学意义( F=248.5,P﹤0.05);其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞,并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。

PAX2基因、细胞侵袭、细胞运动、肾小管、上皮细胞、大鼠

R692.6(泌尿科学(泌尿生殖系疾病))

辽宁省博士科研启动基金计划资助项目20141136

2015-12-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)

共5页

4325-4329

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1007-9572

13-1222/R

2015,(35)

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