泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究

摘要：

目的：检测泛素特异性蛋白酶18（USP18）在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性（细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡）的影响。方法2013年7月—2014年7月选取5种肝癌细胞株（Hep G2、Hep G2.2.15、Hep 3B、Huh -7、SMMC -7721），采用实时荧光定量 PCR（RT - PCR）和 Western blotting 法分别检测 USP18 mRNA 和USP18表达水平，选择表达活性最强的细胞株进行小干扰 RNA（siRNA）转染。利用 LipofectamineTM 2000法将 USP18 siRNA 转染肝癌细胞，分为正常组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组。采用RT - PCR和 Western blotting法检测干扰效率，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线，平板克隆形成实验检测克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期，Annexin V - FITC/ PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5种肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），其中Hep 3B肝癌细胞株中 USP18 mRNA 和 USP18表达水平高于其他4种肝癌细胞株（P ＜0.05），故选取Hep 3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep 3B肝癌细胞株转染 USP18 siRNA 后48 h，转染效率达（91.00±5.67）％。5组干扰效率比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；其中 siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组干扰效率高于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。转染后1、2、3 d，siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组吸光度低于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组克隆形成率低于正常组和阴性对照组，细胞凋亡率高于正常组和阴性对照组（P ＜0.05）。5组细胞周期分布比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。正常组与阴性对照组吸光度、克隆形成率、细胞周期分布、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论 USP18在Hep 3B肝癌细胞株中的表达较高，USP18基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程，增加细胞凋亡。

关键词：肝肿瘤、泛素特异性蛋白酶、细胞增殖、细胞凋亡

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：江西省自然科学基金资助项目20132BAB215019

在线出版日期：2015-11-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：4077-4083